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黄龙山海拔高度是多少|不同海拔高度黄梅衣属地衣松萝酸含量的测定

来源:科技论文 时间:2018-07-20 点击: 推荐访问:不同海拔高度的植物

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  摘要:采集河北省蔚县小五台山和平山县驼梁两地不同海拔高度黄梅衣属淡腹黄梅(Xanthoparmellia mexicana),并采用HPLC分析样品中的松萝酸含量,同时分析了不同检测波长对检测结果的差异。结果表明,各海拔高度样品中的松萝酸含量差异较大,但海拔高度与样品中松萝酸含量变化无相关性。该结果可为研究海拔高度对黄梅衣属地衣松萝酸含量的影响提供参考。

  关键词:淡腹黄梅(Xanthoparmellia mexicana);海拔;松萝酸;高效液相色谱
  中图分类号:Q815 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2014)06-1415-03
  Determination of Usnic Acid in Xanthoparmellia mexicana at Different Altitudes
  YE Jia,ZHANG Hao,ZHANG Ning
  (Department of Biology Science, Handan College, Handan 056005, Hebei, China)
  Abstract: The usnic acid in Xanthoparmellia mexicana at different altitudes from Mountain Xiaowutai and Mountain Tuoliang were compared with HPLC at different altitude. The results showed that the difference of contents of usnic acid in Xanthoparmellia mexicana at different altitudes were significant, with no obvious relationship. It will provide a reference for studying distribution of usnic acid in Xanthoparmellia mexicana at different altitudes.
  Key words: Xanthoparmellia mexicana; altitude; usnic acid; HPLC
  地衣是真菌和藻类共生体,是地球上最古老的生物之一,其命名是以共生真菌为主。全世界已发现并记载的地衣超过500属,26 000多种[1]。地衣的生态环境与生长基物多样,树木、土壤和岩石等表层均有地衣分布[2]。地衣中的松萝酸首先被欧洲科学家发现,随后研究发现黄梅衣属地衣也含有松萝酸[3]。目前,相关研究多集中于提取测定不同种地衣松萝酸,制备松萝酸纯品以及分析松萝酸抗菌性等方面。本试验通过分析驼梁和小五台不同海拔分布的淡腹黄梅(Xanthoparmellia mexicana)地衣中松萝酸含量,为研究海拔高度与黄梅衣属地衣中的松萝酸含量的关系提供参考。
  1 材料与方法
  1.1 采样点
  驼梁位于石家庄平山县境内,属太行山中段东麓。地理坐标为东经113°31′-114°15′、北纬38°09′-38°46′,海拔高度在640~2 281 m,主峰驼梁山海拔2 281 m。驼梁属暖温带半湿润大陆性季风气候,昼夜温差较大,降雨量较好,雨热同期。蔚县小五台山位于河北省西北部山地,位于东经114°47′-115°30′,北纬39°50′-40°07′,其中主峰东台海拔2 882 m[4]。小五台气候属于暖温带大陆季风性山地气候,年平均气温7.1 ℃,年降水量400~700 mm[5]。
  1.2 材料与试剂
  由河北师范大学生物科学实验室和邯郸学院生物科学系提供样品,样品信息见表1。
  松萝酸标准品,购于上海源叶生物科技公司。
  1.3 仪器
  体视显微镜Leica EZ4(北京鼎永泰克科技有限公司);高效液相色谱仪e2695-2489(美国Waters公司)。
  1.4 方法
  1.4.1 标准曲线的测定 称取松萝酸标准品5 mg于10 mL容量瓶中,先用少量三氯甲烷溶解,再用甲醇定容,分别移取0.02~0.05 mL系列体积的母液于10 mL容量瓶中,氯仿定容,得到浓度依次为0.01~0.25 mg/mL的系列标准溶液。分别在254 nm和285 nm下测定上述标准品溶液,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
  1.4.2 地衣松萝酸提取液制备 选取地衣标本,洗净,于60 ℃烘4 h,取烘干样品,研磨得粉末。称量0.2 g左右样品,加8 mL氯仿浸泡后,超声1 h,并以氯仿定容至10 mL,摇匀,10 000 r/min离心60 min,过滤,收集滤液待测。
  1.4.3 松萝酸的测定 液相色谱条件:色谱柱为Symmetry-C18(4.6×250 mm,0.5 μm);流动相为甲醇∶水∶乙酸=81∶14∶5(体积比),柱温30 ℃;进样量10 μL;检测波长254 nm和285 nm。
  2 结果与分析
  2.1 标准曲线的测定
  按上述测定方法分析标准品溶液,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,分别在254 nm和285 nm下分析,得回归方程y=2.5×107x-77 429,R2=0.999 2;y=4.4×107x-60 932,R2=0.999 5,松萝酸在0.01~0.25 mg/mL范围内呈良好线性关系(见图1,图2)。
  2.2 淡腹黄梅的形态学特征
  对淡腹黄梅的叶片、粉芽、下表层等几部分结构,在体视显微镜下进行形态学观察。地衣体呈叶状,圆形或近圆形扩展,疏松或较紧密地贴附在基物上;裂片条状,二叉分裂,宽1~2 mm,裂片紧密相连或瓦覆状排列;上表面黄绿色,稍具光泽,密布颗粒状至杆状裂芽,裂芽高可达0.8 mm,无粉芽;下表面淡褐色,具同色假根,假根单一,不分枝。不同海拔淡腹黄梅形态差异不大,仅在1 300 m标本中观察到子囊盘。在地衣显色反应中髓层K+显色变化时间较短。   2.3 不同海拔高度样品中松萝酸的含量分析
  在254 nm波长条件下测定平山县驼梁5个不同海拔样品中的松萝酸含量,结果见表2,由结果可知,海拔1 500 m样品中的松萝酸含量最高,海拔1 750 m样品中的松萝酸含量最低,各海拔高度样品中的松萝酸含量差异性显著,但海拔高度与样品中松萝酸含量变化未有相关性。
  蔚县小五台山淡腹黄梅的松萝酸含量差异较显著(表3),海拔1 350 m样品中的松萝酸含量最高,海拔1 300 m样品含量最低。与表2相比,蔚县小五台淡腹黄梅松萝酸含量高于平山县驼梁含量。
  上述结果表明,在同种地衣之间,海拔与松萝酸含量无显著相关性。但松萝酸含量在地域中差别较大,蔚县小五台山的淡腹黄梅样品中的松萝酸含量要高于平山县驼梁,该结果与梁瑞霞等[6]研究报道相一致。
  由于松萝酸在254 nm和285 nm下均有吸收,因此,本试验在其他条件不变的情况下,以285 nm为检测波长,分析了淡腹黄梅中松萝酸的含量。结果见表4、表5。
  比较表2和表4,表3和表5可知,相同样品在不同波长条件下,尽管峰面积存在较大差异,但松萝酸含量差异不大,表明2种检测波长对检测结果影响不大。
  需要指出的是,285 nm波长条件下地衣样品的色谱图主峰明显,基线稳定(图3)。由于松萝酸含量升高,降低了对杂质峰的干扰;且在该波长条件下,松萝酸的紫外吸收水平高于254 nm,基线也较为平稳。
  3 讨论
  在制备样品溶液时,松萝酸提取液中的氯仿具有挥发性,因此可将氯仿换成丙酮等低挥发性溶剂,或增强试验的连续性,避免由于提取液中氯仿挥发导致测定结果偏高。另外,样品离心后溶液由于乳化仍呈浑浊状,将提取液抽滤过0.45 μm有机滤膜后,可满足液相色谱分析要求;在液相色谱分析过程中,采用285 nm和254 nm波长测定同一种地衣样品,发现285 nm测定波长较好,适用于松萝酸的检测。
  参考文献:
  [1] 王启林,房敏峰,胡正海.太白山药用地衣的种质资源及其化学成分的研究概况[J].中国野生植物资源.2011,30(4):1-6.
  [2] 陈建斌.地衣特殊性、多样性及其重要性[J].生物多样性,1995, 3(2):113-117.
  [3] 杨东升,苏印泉,彭 锋,等.几种松萝中松萝酸含量及提取物清除DPPH自由基能力测定[J].西北林学院学报,2007,22(4):135-138.
  [4] 刘红霞,谷建才,鲁绍伟,等.小五台森林群落特征及林下物种多样性研究[J].中国农学通报,2009,25(4):97-100.
  [5] 黄晓霞,韩京萨,刘全儒,等.小五台亚高山草甸植物化学成分研究[J].草业科学,2009,26(3):1-8.
  [6] 梁瑞霞,江晓倩,李 稳,等.HPLC法测定不同海拔地衣中松萝酸的含量[J].安徽农业科学,2011,39(19):11458,11479.

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