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中医药治疗痛风_中医药治疗膝骨关节炎实验研究及临床观察

来源:医学论文 时间:2018-08-08 点击: 推荐访问:膝骨关节炎的中医治疗

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  【关键词】膝骨关节炎;中医药治疗
  【中图分类号】R259 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484(2014)03-01290-01
  膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是一种慢性关节疾病,以膝关节软骨退行性改变为核心。膝骨关节炎是我国四大老年病之一,根据我国流行病学研究发现人群的患病率为8.3%,占我国65岁以上人群所有慢性病的50%,国内一项调查显示,35至64 岁人群膝痛和KOA 的患病率分别为13.6 %和10.9 %【1】且以原发性最多见【2】。随着我国老龄化的加剧这一数据将逐步增长,严重的危害了中老年人的健康。根据多年经验总结出健骨方治疗膝骨关节炎,疗效满意,未见明显的毒副作用。
  我们通过动物实验的方法采用TUNEL法检测软骨细胞的凋亡指数(AI)、PCNA法检测增殖指数(PI);免疫组化方法测定关节软骨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、特异性组织基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的平均灰度来综合评价中药健骨方的治疗作用,为临床用药提供依据。具体方法如下:
  1 材料
  1.1 动物及药物
  6月龄新西兰大白兔35只,体重(2.50±0.10)kg,在山东中医药大学第一附属医院动物房饲养。
  中药:
  左归丸:熟地2.75g,山药1.38g,枸杞1.38g,山茱萸1.38g,川牛膝1.03g,鹿角胶1.38g,龟板1.38g,菟丝子1.38g;
  四秒散:苍术2.75g,黄柏2.75g,薏苡仁2.75g,怀牛膝2.75g;
  �g桐丸:�g莶草2.75g,臭梧桐2.75g;
  失笑散:五灵脂0.65g,生蒲黄0.65g;
  健骨方:虎杖1.72g,骨碎补3.44g,土茯苓2.28g,土元2.28g,王不留1.38g,独活2.28g,川牛膝1.72g。
  每日用量根据Meeh-Rubner 公式 A=K×W2/3×10-4,按成人体表面积与家兔体表面积换算。(按每只新西兰兔的每日剂量计算,每次购一周量水煎,4℃保存)
  1.2 主要试剂
  MMP-1、MMP -3、TIMP-1免疫组化检测试剂盒;原位细胞死亡检测试剂盒;3%戊巴比妥钠;生理盐水;甲醛;0.3%过氧化氢甲醇溶液;二甲苯和乙醇。
  2 方法
  2.1 造模方法
  按照日本鬼头康彦等【3】的兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成膝OA病变模型方法。正常饲养1周后将除正常对照组以外各组兔右膝关节腔内注入1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.5ml,隔3天,再注射第2次,共注射2次。
  2.2 实验分组
  按照随机和重复的原则,将35只新西兰兔随机分为7组,A组(正常对照组)、B组(模型对照组)、C组(左归丸组)、D组(四妙散组)、E组(�g桐丸组)、F组(失笑散组)、G组(健骨方组),每组5只。造模后即日开始灌胃给药,每日1次,每次8ml,共计8周。
  2.3 观察指标
  2.3.1 免疫组化法检测MMP-3、TIMP-1平均灰度。
  2.3.2 TUNEL法检测软骨细胞凋亡指数(AI)。
  2.3.3 PCNA法检测软骨细胞增殖指数(PI)。
  3 结果
  3.1 MMP-3、TIMP-1的图像定量分析
  经Leica Qwin V3 图像分析软件分析,测定软骨、滑膜中MMP-3、TIMP-1平均灰度。
  软骨、滑膜中MMP-3平均灰度方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明建模成功;健骨方组、左归丸组、四妙散组、失笑散组、�g桐丸组与模型对照组比较均数降低,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明以上各组可以通过降低软骨细胞中MMP-3平均灰度来改善软骨病变;健骨方组与其他各中药组比较均数降低,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明健骨方组在降低软骨、滑膜中MMP-3平均灰度方面优于其他中药组。软骨、滑膜中TIMP-1平均灰度方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义,表明建模成功;健骨方组、左归丸组、四妙散组、失笑散组、�g桐丸组与模型对照组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明以上各组可以通过增高软骨、滑膜中TIMP-1平均灰度而改善软骨病变;健骨方组与其他各中药组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),说明健骨方组在增高软骨、滑膜中TIMP-1平均灰度方面优于其他各中药组。结果见表1。
  3.2 PCNA法检测软骨细胞增殖指数
  软骨细胞增殖指数方面:模型对照组与正常对照组比较均数降低,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明建模成功;健骨方组与模型对照组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明健骨方组可以通过刺激软骨细胞的增值而改善软骨病变;其他中药组分别与模型对照组比较均数增高,经统计学处理差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。
  3.3 TUNEL检测软骨细胞凋亡指数
  软骨细胞凋亡指数方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明建模成功;骨方组、失笑散组、�g桐丸组与模型对照组比较均数降低,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明以上各组可以通过降低软骨细胞凋亡指数来改善软骨病变;而左归丸组、四妙散组与模型对照组比较均数降低,经统计学处理差异无统计学意义(P>0.05);健骨方组分别与其他各中药组比较均数降低,经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05),表明健骨方组在改善软骨细胞凋亡方面明显优于其他各中药组。结果见表3。   表 1 关节软骨滑膜中MMP-3、TIMP-1的平均灰度 ( ±s, n=5)
  组别 MMP-3 TIMP-1
  正常对照组 24.40±4.72 15.00±5.34
  模型对照组 103.80±4.66▲ 34.60±4.10▲
  左归丸组 88.00±5.43△* 45.00±5.20△*
  四妙散组 92.60±5.86△* 46.40±5.59△*
  �g桐丸组 88.40±4.83△* 45.60±3.97△*
  失笑散组 97.00±4.53△* 46.80±6.72△*
  健骨方组 53.40±4.04△ 57.20±4.26△
  注:与正常对照组比较▲P<0.01;与模型对照组比较△P<0.05;与健骨方组比较*P<0.05
  表2 软骨细胞增殖指数(PI)试验数据( ±s, n=5)
  组别 动 物 编 号 ±s
  1 2 3 4 5
  正常对照组 8 5 8 10 8 7.80±1.79
  模型对照组 6 5 6 7 7 6.20±0.79▲*
  左归丸组 5 7 7 7 8 6.80±1.01△*
  四妙散组 6 6 7 8 7 6.80±0.77△*
  �g桐丸组 5 8 6 6 8 6.60±1.23△*
  失笑散组 8 6 7 7 6 6.80±0.76△*
  健骨方组 8 6 7 9 8 7.60±1.03
  注:与正常对照组比较▲P<0.01;与模型对照组比较△P>0.05;与健骨方组比较*P<0.05表3 软骨细胞凋亡指数(AI)试验数据( ±s, n=5)
  组别 动 物 编 号 ±s
  1 2 3 4 5
  正常对照组 5 8 4 6 6 5.80±1.48
  模型对照组 30 24 37 26 35 30.40±5.09▲●
  左归丸组 24 40 26 36 25 30.20±6.75△●
  四妙散组 32 36 33 24 21 29.20±5.85△●
  �g桐丸组 23 26 21 35 23 25.60±5.07*●
  失笑散组 30 18 18 41 17 24.80±9.92*●
  健骨方组 20 13 19 18 6 15.20±5.27*
  注:与正常对照组比较▲P<0.01;与模型对照组比较△P>0.05,*P<0.05;与健骨方组比较●P<0.05
  四、讨论
  膝骨关节炎患者多年事已高,阴血不足,肝肾亏虚,正虚于内,易招致风寒湿热之邪,下注关节而致病,在临床实践中,我们发现膝骨关节炎在急性发病时往往关节疼痛较剧烈,肿胀,屈伸不理,伴有局部灼热,口苦咽干,苔黄,便干等湿热证的临床表现,由此我们在正气亏虚,肝肾不足的基础上,发现湿热瘀毒在膝骨关节炎的发病中的重要作用,从而提出了补益肝肾,清热利湿,活血化瘀为治法治则,本次动物实验研究证实健骨方在治疗膝骨关节炎方面明显优于左归丸、四妙散、�g桐丸与失笑散,从而为健骨方在临床的有效应用提供了有力的证据。
  参考文献:
  [1] 臧长海,曾庆馀,李小峰,等.太原市膝骨关节炎的流行病学研究[J].中华内科杂志,2006 ,45(7) :533-536
  [2] 戴显伟,赵浩亮.外科学.人民卫生出版社,2007:847-849.J。
  [3] 刘谟震.MMP-12在类风湿关节炎中和骨性关节炎中的研究[J].医师进修杂志, 2004,27(6):23

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